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Western blot

内分泌

关键词内分泌 实验技术 免疫检测

词汇介绍

拓展阅读

解析

Western   英 /'west(ə)n/   美 /'wɛstɚn/

释    义   adj. 西方的,西部的;有西方特征的

               n. 西方人;西部片,西部小说

               n. (Western)人名;(英)韦斯顿

例    句   He will not be Eastern, he will not be Western, or he will be both together. 他不会是东方人,他不会是西方人,或者他将两者兼具。

 

blot   英 /blɒt/   美 /blɑt/

释    义   v. (用软纸或布)吸干;把墨水溅到(纸上);弄脏;玷污……的品性;(使)模糊,遮蔽;从记忆中抹去;(生化)印迹

               n. 污渍,墨渍,油漆斑;污点,耻辱;瑕疵,美中不足;(生化)印迹法

               n. (Blot) (法、德、美)布洛(人名)

例    句   Honestly face your inner conflicts and blot, do not deceive yourself. 诚实的面对你内心的矛盾和污点,不要欺骗你自己。

概述

免疫印迹(有时称为蛋白免疫印迹)是一种在分子生物学领域广泛使用的分析技术,主要是免疫遗传学和其它分子生物学学科用来检测特定蛋白质组织匀浆或提取物。应用蛋白质印迹广泛用于生物化学中,用于定性检测单个蛋白质和蛋白质修饰(例如翻译后修饰)。它被用作鉴定复杂蛋白质混合物中特定单个蛋白质的存在的一般方法。蛋白质的半定量估计可以从印迹膜上蛋白质条带的大小和颜色强度得出。此外,可以使用稀释系列的已知浓度的纯化蛋白质来更精确地估计蛋白质浓度。蛋白质印迹通常用于克隆后蛋白质产生的验证。它还用于医学诊断,例如H

Protein purification and analysis: next generation Western blotting techniques复制标题

蛋白质纯化和分析: 下一代Western blotting技术

发表时间:2017-11-04

影响因子:3.0

作者: Manish Mishra

期刊:Expert Rev Proteomics

The western blot is a common method used to detect proteins as well as posttranslational modifications on proteins, and can provide semi-quantitative or quantitative data about the target protein in simple or complex biological samples. Western blotting is an extensively used technique for protein analysis. It is a multistep procedure (Figure 1) that typically involves a) sample preparation (protein extraction and measurement of protein concentration) from cells or tissue lysates, b) separation of proteins by size on sodium dodecyl sulphate (SDS) polyacrylamide gel by electrophoresis, c) immobilization of separated proteins in a nitrocellulose or polyvinylidene fluoride (PVDF) membrane, d) blocking of non-specific proteins on membrane, e) probing of target proteins with specific primary antibodies, e) incubation with secondary antibody conjugated with labelled chemiluminescent or fluorescent molecule, f) detection of signal that reflects antigen/ antibody binding, g) densitometry analysis of protein bands of interest using a software. Variations at any step of the process can influence the result. Thus, care must be taken to standardize each step of the western blot process for reproducibility and high sensitivity.

译文

蛋白质印迹是用于检测蛋白质以及对蛋白质进行翻译后修饰的常用方法,并且可以提供关于简单或复杂生物样品中的靶蛋白质的半定量或定量数据。蛋白质印迹是一种广泛用于蛋白质分析的技术。这是一个多步骤程序(图1),通常涉及a)细胞或组织裂解液的样品制备(蛋白质提取和蛋白质浓度测量),b)通过电泳分离十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶上的蛋白质, c)将分离的蛋白质固定在硝酸纤维素或聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上,d)阻断膜上的非特异性蛋白质,e)用特异性一抗探测靶蛋白质,e)与缀合有标记化学发光的二抗孵育或荧光分子,f)检测反映抗原/抗体结合的信号,g)使用软件对感兴趣的蛋白质条带进行光密度分析。过程中任何步骤的变化都会影响结果。因此,必须注意使蛋白质印迹过程的每个步骤标准化以获得再现性和高灵敏度。