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Fluorescence-Activated Cell Sorting

肿瘤

关键词肿瘤 实验技术 细胞分析

词汇介绍

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解析

Fluorescence   英 /flʊə'res(ə)ns; flɔː-/   美 /flʊə'rɛsns/
释    义   n. 荧光;荧光性
同根词   adj.fluorescent 荧光的;萤光的;发亮的
例    句   The dashboard itself is divided into three vacuum Fluorescence Displays.  仪表板本身划分为三个真空荧光显示器。
 
Activated   英 /'æktɪveɪtɪd/   美 /'æktə,vetɪd/ 
释    义   adj. 活性化的;活泼的
               v. 使激活;使活动起来;有生气(activate的过去分词)
同根词   adj.active 积极的;活跃的;主动的;有效的;现役的
例    句   Once each download is complete, the codes will be activated through beams of light.   一旦每个下载都完成了,代码在光柱作用下将被激活。
 
Cell   英 /sel/   美 /sɛl/ 
释    义   n. 细胞;电池;蜂房的巢室;单人小室
               vi. 住在牢房或小室中
同根词   n.cellularity 细胞性;多孔性;细胞结构
例    句   Each cell can only be owned by one feature.   每个细胞只能拥有一特征。
 
Sorting   英 /'sɔːtɪŋ/   美 /'sɔrtɪŋ/
释    义   n. [计] 排序;整理;分类拣选
同根词   adj.sorted 分类的;分选的;挑选的
例    句   How do you test speed of sorting algorithm?   如何测试排序算法的速度?

概述

概述


荧光激活细胞分选FACS),也叫做流式细胞分选(FCMSflow cytometry sorting)。该技术是利用流式细胞分选仪,以高能量激活照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞(或微粒)的物力、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术。该技术是上世纪70年代发展起来的高科学技术,集计算机技术、激光技术、流动力学、细胞化学以及细胞免疫学于一体。该技术不仅可以测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可以检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNARNA含量等。该技术可以根据发射光的荧光强度和波长将发光细胞(颗粒)亚群分开并可实现单克隆分选,对细胞进行鉴定、分类、定量和分离,分选纯度>95%。在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。


原理及流程


FACS主要是原理利用激光激发高速匀速运动的带有各种荧光标记的微粒,并检测微粒由此产生的散射光信号和荧光信号来反应微粒的各个参数,并将特定性状的微粒分选出来的过程。操作流程并不复杂,其主要分为以下几个过程:


1、制备单细胞悬液;将待检测细胞或微粒制成单细胞悬液,经特异性荧光染料标记抗体进行染色。待检测或分选的样品制备好后,进行上机(流式分选仪)。样品在恒定气体的压力下进入流动室,不含细胞或微粒的缓冲液在高压下从鞘液管入口方向与待测样品流形成一定角度,鞘液包绕这样高速流动,组成一个圆柱形的液流束,待细胞或微粒在鞘液的包被下单行排列,依次通过检测区域。


2、收集单细胞上的荧光信号;流式分选仪以激光作为发光源,经过聚焦整形后的光束垂直照射在样品流上,细胞或微粒上的荧光染料被激发,产生散射光和激发荧光。光散射信号在前向小角度进行检测,这种信号基本上反映了细胞体积的大小,荧光信号的接受方向与激光束垂直,经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离,形成多个不同波长的荧光信号。


3、再次统计结果;荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原强度或细胞内物质的浓度,经光电转换变为可被计算机识别的数字信号,计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理,将分析结果显示在计算机上。


4、细胞分选;细胞分选指的是根据所测定的各个参数将指定的细胞从细胞群体中分离出来的一种方式,通过分离含有单细胞的液滴实现。在流动室的喷口上方配有一个超高频的压电晶体,产生的振动使喷出的液流形成均匀的液滴,待测细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷,当液滴流经带有几千伏特的偏转板时,在高压电场的作用下偏转,落入各自的收集容器中,不予充电的液滴落入中间的废液容器,从而实现细胞的分离。


特点


FACS相较于其他细胞分选方式来讲,具有较多优势,其主要特点有:1、分选纯度较高;经过流式细胞分选获得的细胞纯度一般能达到90%以上,而较好的磁珠分选操作获得的细胞纯度一般在80-90%2、多参数分选;流式分选很大的优势在于其能够同时进行不同细胞亚群多通道分选,且可以正向分选和负向分选同时进行;目前常用的BD公司的流式细胞分选仪能够同时进行4路分选;3、不仅可以通过细胞膜表面抗原进行分选,也可以根据任何可以检测到的荧光信号进行分选(来自胞内);而这些针对胞内成分进行分选的技术是磁珠分选无法实现的;4、低表达细胞亚群分选;相较于其他的细胞分选技术,尤其是磁珠分选,流式细胞分选术的另一优势就是能够对表达较低的,甚至比例只有百分之几的细胞群实现分离。

Isolation of Live Fibroblasts by Fluorescence-Activated Cell Sorting复制标题

隔离的成纤维细胞通过荧光激活细胞分选

发表时间:2017-06-03

影响指数:0.0

作者: Tripp Leavitt

期刊:Methods in Molecular Biology

Flow cytometry and fluorescence-activated cell sorting (FACS) have helped to revolutionize the field of cell biology. They permit the characterization of cell populations harvested from living tissues or from cell culture. Simultaneous multiparametric analysis of thousands of particles per second is possible with current technologies. Additionally, data from this analysis can be utilized in “real time” through FACS, separating and isolating particular cells of interest. While virtually any mammalian tissue can be processed for flow cytometry, herein we focus on the characterization and isolation of fibroblast populations from the dermis of mouse skin.

译文

流式细胞术和荧光激活细胞分选术(FACS)有助于彻底改变细胞生物学领域。 它们允许表征从活组织或细胞培养物中收获的细胞群。 使用现有技术可以同时对每秒数千个粒子进行多参数分析。 另外,来自该分析的数据可以通过FACS“实时”使用,分离和分离感兴趣的特定细胞。 虽然几乎任何哺乳动物组织都可以进行流式细胞术,但本文我们主要关注从小鼠皮肤真皮中表征和分离成纤维细胞群。

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