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Colony Formation assay

肿瘤

关键词肿瘤 实验技术 细胞接种活率检测

词汇介绍

拓展阅读

解析

Colony   英  ['kɒlənɪ]   美  ['kɑləni]

       n. 殖民地;移民队

同根词   adj. colonial 殖民地的,殖民的

       This colony was captured by the British in 17th century.  这个殖民地是在17世纪被英国人占领的。

 

Formation   英  [fɔː'meɪʃ(ə)n]   美  [fɔr'meʃən]

       n. 形成;构造;编队

       What is its formation mechanism?  它的形成机制是什么?

 

assay   英  [ə'seɪ; 'æseɪ]   美  [ə'se]

       n. 化验;试验

               vt. 分析;化验;尝试

               vi. 鉴定;经检验证明内含成分

同根词   n.assayer 试金者,尝试者;分析专家

      Each assay index all becomes normal.  各项化验指标恢复正常。

概述

概述


克隆形成是常见的细胞实验技术,是检测细胞增殖能力、侵袭性、对杀伤因素敏感性等的重要技术方法。该方法一般包括平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验。由于细胞生物学性状不同,细胞克隆形成率差别也很大,正常细胞克隆形成率较弱,而肿瘤细胞则较强;初代培养细胞克隆形成率弱,传代细胞系强;二倍体细胞克隆形成率弱,转化细胞系强。


原理


克隆形成的基本原理是单个细胞在体外持续增殖6代以上,其后代所组成的细胞群体,成为克隆或是集落。每个克隆含有50个以上的细胞,大小在0.3-1.0 mm之间。克隆或是集落形成率表示细胞的独立生存能力。各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测,细胞克隆形成率即细胞接种活率,表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。该方法由于它是通过检测活细胞的增值能力,相较于其他方法,能够避免在绘制生长曲线时将死细胞或是不能再分裂的细胞计数在内而导致的实验结果误差。同时在开展克隆形成实验时,需要注意细胞接种密度,因为克隆形成率与接种密度具有一定关系,接种细胞时一定要分散成单细胞悬液,直接接种在培养皿或平板(246孔板)中,一般持续培养2周左右,到细胞形成克隆时终止培养。


实验方法


克隆形成检测一般包含两种方法。1、平板克隆形成实验;该实验方法适用于贴壁生长的细胞,包括培养的正常细胞和肿瘤细胞;该方法首先是将对指数生长期细胞,采用常规消化传代方法制成细胞悬液,对细胞悬液进行反复吹打,使细胞充分分散,单个细胞百分率应在95%以上;细胞计数,并用培养基调节细胞浓度待用;根据细胞增殖能力,将细胞悬液倍比稀释,一般按照每皿50100200个细胞的浓度分别接种5 mL细胞悬液到培养皿中,以十字方向轻轻晃动培养皿,使细胞分散均匀(接种细胞这一步,也可以采用流式分选的方法,计数一定的单细胞数接种到合适的培养容器中);将培养皿放置于37℃、5%CO2中培养2-3周,中间根据培养基PH变化适时更换新鲜培养液;当培养皿中出现肉眼可见克隆时,终止培养,弃去培养基,PBS液小心清洗2次,采用甲醇或者多聚甲醛固定10-20分钟,GIMSA染色液染色10-30分钟;计算克隆形成率=(克隆数/接种细胞数)x100%;分析统计结果。2、软琼脂克隆形成实验;该方法适用于非锚着依赖性生长的细胞,比如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系等。利用琼脂液无粘着性又可凝固的特性,将细胞混入琼脂液中,琼脂液凝固使细胞置于一定位置,琼脂中细胞可能向周围作全方位的移动,因此可以用来检测肿瘤细胞的主动移动能力;细胞在适宜培养基中又可以增殖,从而可以测定细胞克隆形成率;造血系统软琼脂克隆形成方法相同,主要是用于有关细胞分化的研究,但使用的培养基有所区别;该方法的主要步骤为先制备单细胞悬液,计数后进行倍数稀释;分别制备1.2%0.7%两个浓度的低熔点琼脂糖液,高压灭菌后,维持在40℃中不凝固状态;将1.2%的琼脂糖和培养基混合后注入培养皿中,冷却凝固作为底层琼脂放置培养箱中备用;将0.7%的琼脂糖和培养基混合后,再加入细胞悬液,充分混匀后注入铺有底层琼脂的培养皿中,形成双琼脂层;待上层琼脂凝固后,放于37% 5%CO2的培养箱中,培养10-14天;把培养皿放置在倒置显微镜下,观察细胞克隆数,计算形成率。

The FOXM1 inhibitor RCM-1 decreases carcinogenesis and nuclear β-catenin复制标题

FOXM1抑制剂RCM-1降低癌变和核 β-连环蛋白

发表时间:2019-04-30

影响指数:4.9

作者: Samriddhi Shukla

期刊:Mol. Cancer Ther.

The ability of tumor cells to form colonies is a measure of tumorigenicity in vitro. Effect of RCM-1 on the in vitro colony forming potential of different tumor cells was determined using anchorage-dependent colony formation assay. Dose-dependent inhibition of colony formation was observed in Rd76-9, B16-F10, H2122, 4T1 and KPC-2 tumor cells; as low as 5 µM RCM-1 effectively inhibited colony formation. RCM-1 also inhibited the colony formation in A549 and LLC lung adenocarcinoma cells. Next, we used scratch assay to examine the effects of RCM-1 on tumor cell migration. RCM-1 significantly inhibited the migration of H2122, 4T1, KPC-2 and A549 cells. Altogether, these data demonstrate that RCM-1 inhibits the ability of tumor cells to form colonies and migrate in vitro.

译文

肿瘤细胞形成集落的能力是体外致瘤性的量度。 使用锚定依赖性集落形成测定法测定RCM-1对不同肿瘤细胞的体外集落形成潜力的影响。 在Rd76-9,B16-F10,H2122,4T1和KPC-2肿瘤细胞中观察到剂量依赖性的集落形成抑制; 低至5μMRCM-1有效抑制集落形成。 RCM-1还抑制A549和LLC肺腺癌细胞中的集落形成。 接下来,我们使用划痕试验来检查RCM-1对肿瘤细胞迁移的影响。 RCM-1显着抑制H2122,4T1,KPC-2和A549细胞的迁移。 总之,这些数据表明RCM-1抑制肿瘤细胞形成集落并在体外迁移的能力。

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