Immunohistochemistry   /'ɪmjʊnəʊ,hɪstəʊ'kemɪstrɪ/ 

释    义   免疫组织化学

同根词   immunological   adj. 免疫学的

例    句   The RPE cells were identified by DOPA staining and immunohistochemistry.

               用多巴（DOPA）染色和免疫组织化学鉴定RPE细胞。

概述

免疫组织化学又简称为免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子或是同位素）显色，利用光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜进行实验结果观察，从而确定组织细胞内抗原（多肽或者蛋白质），对其进行定位、定性以及定量的研究，称之为免疫组织化学技术，又可称为免疫细胞化学（ICC，immunocytochemistry）。该技术是病理诊断中常规的技术手段。

原理

IHC技术的基本原理是利用了抗体和抗原之间的高度特异性结合。先将组织或者细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或者半抗原去免疫小鼠、大鼠或者兔子等实验动物，从而制备获得特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理获得二抗。采用一抗去结合和识别组织或细胞中的目的化学成分，再用二抗去结合一抗，将抗原放大，由于抗体与抗原结合形成的免疫复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来，常用显色剂为DAB显示为棕黄色颗粒。通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或者组织中的化学成分，在显微镜下即可清晰看见细胞内发生抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或者组织原位确定某些化学成分的分布和含量。组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可以用相应的特异性抗体进行检测。目前IHC技术已经非常成熟，同时，针对人类许多重要化学成分（蛋白、多肽等等）几乎均已有商业化抗体，以及相对应的用于IHC的二抗。

IHC技术根据抗原抗体结合方式可以分为三种方法：1、直接法；将已知的特异性抗体与标记物结合，制备成带有标记的抗体，采用该抗体直接与标本内的相应抗原结合，该方法因为一抗带有标记因此不再需要二抗。2、间接法；用未标记的一抗与标本内相应的抗原物质结合，用带有标记的二抗与一抗结合，再进行呈色；该方法是应用较多的常规IHC方法。3、酶桥法；该方法是制备同种属的特异性一抗和炕酶抗体（三抗），利用二抗作为桥梁将三抗与一抗连接起来，三抗的标记酶经酶促反应即可在抗原位置上呈现有色阳性反应产物。另外，根据IHC技术中所使用的标记物的成分分为：1、免疫荧光法；2、免疫酶法；3、免疫铁蛋白法；4、免疫金法等。现应用于病例诊断的主要为免疫荧光法和免疫酶法。

操作

目前在病理诊断中广为使用的有PAP法（过氧化物酶-抗过氧化物酶）、ABC法（卵白素-生物素-过氧化物酶复合物）、SP法（链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶），这三种方法均属于免疫酶法。在此以SP法为例，整理了该技术的大致操作流程：1、标本固定，固定的目的是使细胞内的蛋白质凝固，保存组织或细胞内的抗原，使其不失活或弥散，常用的固定剂为4%多聚甲醛；2、脱水、石蜡包埋样本并进行制片；3、脱蜡和水化，使组织恢复到固定后的正常状态暴露出抗原以方便与一抗结合；4、抗原修复，由于组织在固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而掩盖抗原决定簇，通过抗原修复，使得细胞内抗原决定簇重新暴露，提高抗原检测效率，常用的抗原修复有酸修复（柠檬酸盐修复）和碱修复（EDTA修复），需根据抗原性质进行选择；5、灭活内源性过氧化物酶，IHC反应容易受到内源性过氧化物酶的干扰，因此需采用过氧化氢等进行灭活和封闭；6、血清封闭，为防止一抗与组织的非特异性结合造成假阳性，一般会采用BSA、山羊血清等封闭这些位点；7、一抗和二抗孵育，根据抗体说明选择合适的抗体浓度和孵育时间；8、切片清洗，一般采用PBS或TBS；9、DAB显色，染色背景的深浅和特异性染色的深浅都可由DAB孵育条件决定；10、复染，常规采用苏木素复染指示细胞核，从而显示出细胞的组织形态结构；11、封片、镜检，为使IHC染色的片子保存长久，通常会采用中性树胶等封片。IHC技术具有特异性强、敏感性高以及定位准确、形态与功能相结合的优点，在病理学研究中具有十分重要的应用价值。