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Detection of ABL kinase domain mutations with denaturing high-performance liquid chromatography.
用变性高效液相色谱法检测 ABL 激酶结构域突变。

摘要

Mutations of the ABL kinase domain (KD) are common in patients with chronic myelogenous leukemia (CML) who develop resistance to imatinib. We developed an RT-PCR-based denaturing high-performance liquid chromatography (D-HPLC) assay to detect mutations of the ABL KD. Validation experiments using mixtures of wild type and mutant amplicons showed that the D-HPLC assay could detect mutant transcripts when they represented at least 15% of the total, and was thus twice as sensitive as automated sequencing. When D-HPLC was applied to 30 cDNAs from patients with imatinib resistance that had previously been characterized for KD mutations by direct sequencing of BCR-ABL RT-PCR products, there was concordance in 97% of samples. Resequencing confirmed the original mutations in all cases. In addition, sequencing of individual clones detected a mutation in one sample that had been mutation-positive by D-HPLC but wild type by conventional sequencing. In serial samples from the same individuals, D-HPLC detected mutations as early as 260 days before hematological relapse. D-HPLC is suitable for routine clinical monitoring of CML patients for emergence of KD mutations and may be useful for optimizing therapy. Early detection of emerging mutant clones may aid in guiding decisions regarding alternative treatment options.

译文

ABL 激酶结构域 (KD) 的突变在对伊马替尼产生耐药性的慢性粒细胞白血病 (CML) 患者中很常见。我们开发了一种基于 RT-PCR 的变性高效液相色谱法 (D-HPLC) 检测 ABL KD 的突变。使用野生型和突变型扩增子混合物的验证实验表明,当突变型转录物至少占总数的 15% 时,D-HPLC 分析可以检测到突变型转录物,因此灵敏度是自动测序的两倍。当 D-HPLC 应用于来自伊马替尼耐药患者的 30 个 cdna 时,这些患者以前通过 BCR-ABL RT-PCR 产物的直接测序来表征 KD 突变,97% 的样本中存在一致性。重新测序证实了所有病例的原始突变。此外,单个克隆的测序检测到一个样本中的突变,该样本在 D-HPLC 中呈突变阳性,但在常规测序中呈野生型。在同一个体的连续样本中,D-HPLC 早在血液系统复发前 260 天就检测到突变。D-HPLC 适用于 CML 患者出现 KD 突变的常规临床监测,并可能有助于优化治疗。早期发现新出现的突变克隆可能有助于指导关于替代治疗方案的决策。

denaturing high performance liquid chromatography

肿瘤 DHPLC 实验技术
概述  :  

变性高效液相色谱分析(DHPLC),又叫温度调节的杂合双链分析(TMHA),是利用在部分变性条件下同源、异源双链特征的差异进行变异检测。另外,在非变性条件或完全变性条件下,DHPLC还可用于分离、分析单链核酸片段。这一技术最先由Oefner于1995年建立,现已有公司生产出商业化的检测仪器。目前全球使用最多也最易操作的是美国Tansgenomic公司开发的WAVE核苷酸片段分析系统,它通过一个独特的DNA色谱柱-DNASep柱进行核酸片段的分离和分析。  原理 DHPLC技术的

Denaturing 

释    义   v. 变性;使失去本性(denature的ing形式)

例    句   Denaturing is required to clearly distinguish such meat products from those prepared and approved for human consumption. 变性是必要的,以便将这种肉类产品与那些经过制配和获准用于人类消费的产品明确区分开来。

 

High   英 /haɪ/   美 /haɪ/

释    义   adj. 高的;高级的;崇高的;高音调的

               n. 高水平;天空;由麻醉品引起的快感;高压地带

               adv. 高;奢侈地

同根词   higher adj. 更高的,较高的(high的比较级)

               highly adv. 高度地;非常;非常赞许地

               height n. 高地;高度;身高;顶点

               heighten vi. 升高;变强

               heighten vt. 提高;增高;加强;使更显著

例    句   You overvalued the high tech of that product. 你对那种产品的高科技性评价过高了。

 

Performance   英 /pəˈfɔːməns/   美 /pərˈfɔːrməns/

释    义   n. 性能;绩效;表演;执行;表现

例    句   The audience was inexpressibly astonished at the brilliant performance. 那出色的表演使观众感到说不出的惊讶。

 

Liquid   英 /ˈlɪkwɪd/   美 /ˈlɪkwɪd/

释    义   adj. 液体的;清澈的;明亮的;易变的

               n. 液体,流体;流音

同根词   liquor n. 酒,含酒精饮料;溶液;液体;烈酒

               liquidity n. 流动性;流动资产;[金融] 偿债能力

               liquidation n. 清算;偿还;液化;清除

               liquidator n. 清算人;公司资产清理人

               liquidizer n. 榨汁机;食物液化器(等于blender)
例    句   You have added too much liquid to the mixture. 你给这混合物加进了过多的液体。

 

Chromatography   英 /ˌkrəʊməˈtɒɡrəfi/   美 /ˌkroʊməˈtɑːɡrəfi/

释    义   n. 色层分析;色谱分析法

同根词   chromatographic adj. 色析法的;层离法的

               chromatographically adv. 色析法地;层离法地

               chromatogram n. [分化] 色谱图;[分化] 色层分离谱

例    句   To do this, the oils were broken into their component parts and analysed using gas chromatography and mass spectrometry. 实验过程中,他们将油分解成各自的组成成分,用气体色谱分析法和质谱分析法进行分析。

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