CBC CFE CoSC Differentiation FACS Flow Cytometry Analysis GRP IEC IHC ISC PC Paneth cell Single-Cell Sorting Stemness colonic stem cell colony-forming efficiency crypt base columnar fluorescence-activated cell sorting green fluorescent protein immunohistochemistry intestinal epithelial cell intestinal stem cell qRT-PCR quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction
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摘要

BACKGROUND & AIMS:Identification of intestinal stem cells (ISCs) has relied heavily on the use of transgenic reporters in mice, but this approach is limited by mosaic expression patterns and difficult to directly apply to human tissues. We sought to identify reliable surface markers of ISCs and establish a robust functional assay to characterize ISCs from mouse and human tissues.
METHODS:We used immunohistochemistry, real-time reverse-transcription polymerase chain reaction, and fluorescence-activated cell sorting (FACS) to analyze intestinal epithelial cells isolated from mouse and human intestinal tissues. We compared different combinations of surface markers among ISCs isolated based on expression of Lgr5-green fluorescent protein. We developed a culture protocol to facilitate the identification of functional ISCs from mice and then tested the assay with human intestinal crypts and putative ISCs.
RESULTS:CD44(+)CD24(lo)CD166(+) cells, isolated by FACS from mouse small intestine and colon, expressed high levels of stem cell-associated genes. Transit-amplifying cells and progenitor cells were then excluded based on expression of GRP78 or c-Kit. CD44(+)CD24(lo)CD166(+) GRP78(lo/-) putative stem cells from mouse small intestine included Lgr5-GFP(hi) and Lgr5-GFP(med/lo) cells. Incubation of these cells with the GSK inhibitor CHIR99021 and the E-cadherin stabilizer Thiazovivin resulted in colony formation by 25% to 30% of single-sorted ISCs.
CONCLUSIONS:We developed a culture protocol to identify putative ISCs from mouse and human tissues based on cell surface markers. CD44(+)CD24(lo)CD166(+), GRP78(lo/-), and c-Kit(-) facilitated identification of putative stem cells from the mouse small intestine and colon, respectively. CD44(+)CD24(-/lo)CD166(+) also identified putative human ISCs. These findings will facilitate functional studies of mouse and human ISCs.

译文

背景与目的: 肠道干细胞 (ISCs) 的鉴定在很大程度上依赖于在小鼠中使用转基因报告基因, 但是这种方法受到镶嵌表达模式的限制,难以直接应用于人体组织。我们试图鉴定 ISCs 可靠的表面标记,并建立一个强大的功能测定来表征来自小鼠和人体组织的 ISCs。
方法: 我们使用免疫组织化学、实时逆转录聚合酶链反应和荧光激活细胞分选 (FACS) 来分析从小鼠和人肠道组织中分离出来的肠上皮细胞。我们比较了基于 Lgr5-green 荧光蛋白表达分离的 ISCs 中表面标记的不同组合。我们开发了一种培养方案,以促进从小鼠中鉴定功能性 isc,然后用人类肠隐窝和假定的 isc 进行测试。
结果: 通过 FACS 从小鼠小肠和结肠中分离出的 CD44 () CD24 (lo) CD166 () 细胞表达了高水平的干细胞相关基因。然后根据 GRP78 或 c-Kit 的表达排除转运扩增细胞和祖细胞。来自小鼠小肠的 CD44 () CD24 (lo) CD166 () GRP78 (lo/-) 推定干细胞包括 Lgr5-GFP (hi) 和 Lgr5-GFP (med/lo) 细胞。这些细胞与 GSK 抑制剂 CHIR99021 和 E-cadherin 稳定剂 Thiazovivin 一起孵育导致集落形成 25% 至 30% 的单分类 isc。
结论: 我们开发了一种培养方案,基于细胞表面标记从小鼠和人体组织中鉴定假定的 ISCs。CD44 () CD24 (lo) CD166 () 、 GRP78 (lo/-) 和 c-Kit (-) 促进了来自小鼠小肠和结肠的假定干细胞的鉴定, 分别。CD44 () CD24 (-/lo) CD166 () 也鉴定了假定的人类 isc。这些发现将有助于小鼠和人类 ISCs 的功能研究。

colony formation assay

肿瘤 细胞培养 实验技术
概述  :  

非整倍体无限细胞系和癌细胞株中,仍然存在不同细胞亚群,它们的功能和生长特点有些差异,其中有些亚群细胞对培养环境有较大的适应性和具有较强的独立生存能力,细胞集落率高。纯化细胞群来自一个共同的祖细胞,细胞遗传性状、生物学特性相似,利于实验研究。原代培养细胞和二倍体有限细胞系,细胞集落率很低。细胞集落化培养之前,应先测定细胞集落形成率,以了解细胞在极低密度条件下的生长能力。目前认为仅有肿瘤干细胞具有形成集落的能力,集落抑制率常用于抗癌药物敏感试验、肿瘤放射生物学试验。集落抑制率=(1-(实验组集落

Colony   英 /ˈkɒləni/   美 /ˈkɑːləni/

释    义   n. 殖民地;移民队;种群;动物栖息地

同根词   colonial adj. 殖民地的,殖民的

               colonist adj. 殖民主义者的;奉行殖民主义的

               colonialist adj. 殖民主义者的

               colonial n. 殖民地居民

               colonist n. 殖民者;殖民地居民;移民

               colonization n. 殖民;殖民地化
               colonialism n. 殖民主义;殖民政策;

例    句   But researchers say they do not know if this virus causes a colony to collapse. 但研究人员说,他们不知道是否是这个病毒引起的一个群体瓦解。

 

Formation   英 /fɔːˈmeɪʃn/   美 /fɔːrˈmeɪʃn/

释    义   n. 形成;构造;编队

例    句   The formation of anything is not easy, has its infancy and progressive development of the process. 任何事物的形成都不是一蹴而就的,都有其萌芽和逐渐发展的过程。

 

Assay   英 /əˈseɪ/   美 /əˈseɪ/

释    义   n. 化验;试验;vt. 分析;化验;尝试;vi. 鉴定;经检验证明内含成分

同根词   assayer n. 试金者,尝试者;分析专家

例    句   What meaning is this assay? 这个化验是什么意思?

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