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786-0 kidney cancer cells

肾内泌尿

关键词肾内泌尿 实验材料 细胞

词汇介绍

拓展阅读

解析

Kidney   英  /ˈkɪdni/   美  /ˈkɪdni/

释    义   n. [解剖] 肾脏;腰子;个性

例    句   Health experts say ingesting a small amount of melamine poses no danger, but in larger doses, it can cause kidney stones and lead to kidney failure.健康专家表示,摄入小量三聚氰胺不会有危险,但如果摄入量很大,可导致肾结石,并会诱发肾衰竭。

 

Cancer   英  /ˈkænsə(r)/   美  /ˈkænsər/

释    义   n. 癌症;恶性肿瘤

例    句   The percentage of false negatives generated by the cancer test is of great concern.癌症检查的结果中,假阴性占一定比例的现象受到极大关注。

 

Cells

释    义   n. [细胞] 细胞;单元格(cell的复数);牢房;小屋

例    句   The technique consists of injecting healthy cells into the weakened muscles.这项技术包括把健康细胞注射进衰弱的肌肉里。

概述

概述


786-0细胞源自一个原发性透明细胞癌,最初来自一位58岁的男性肾细胞癌患者的肾,786-0细胞有微绒毛和桥粒,能在软琼脂内生长。细胞生成的一个PTH样的多肽与乳癌和肺癌中的肽相似。这个多肽的N端与PTH相似,活性与PTH相似,分子量为6000道尔顿。细胞的形态是上皮样细胞,生长特性是贴壁生长。该细胞系基本的生长的培养基是RPMI-1640。培养条件是37CO2 5%。主要用于肾癌相关基因或者药物功能研究中。


细胞复苏


提前将水浴锅预热到37;用75%的酒精擦拭并使用紫外线消毒30分钟超净工作台;将需要用到的离心管、吸管等消毒备用;取出装有细胞系的冻存管;迅速放入已经预热的水浴锅中解冻,并不断摇动,使管中的液体迅速融化;将细胞转移到一个15ml的离心管中,加入预热好的培养基,同时一边晃动离心管,培养基差不多加入10ml


细胞培养


所有的操作均为无菌操作,提前预测水浴锅,使温度为37;打开培养瓶的盖子,洗掉旧的培养液,使用PBS缓冲液洗涤细胞2-3次;加入trypsin-EDTA溶液,轻洗细胞皿底部,吸掉溶液,放入37度培养箱中2-3分钟,轻拍培养瓶壁使大部分细胞脱落,于倒置显微镜下观察,当细胞呈圆形时,加入适量含血清的新鲜培养基终止trypsin作用;以吸管上下吸放数次以打散细胞团块,混合均匀后,补足3nn为传代瓶数)ml培养基,按一定比例稀释后转移到新的培养瓶中;375% CO2条件下培养。


细胞冻存


将对数正常期的细胞悬液,1500转离心8分钟后,弃上清,在细胞沉淀中加入适量冻存液(含有DMSO和胎牛血清),重悬后,转入细胞冻存管中,移入负20度冰箱冷冻45分钟,然后放入负80度冰箱过夜,最终放置在液氮中长期保存。


细胞收集与计数


当细胞覆盖培养瓶底部面积的90%时收集细胞,弃去培养基,使用PBS缓冲液洗涤。加入胰酶,半分钟后迅速加入8ml胎牛血清终止反应,转移到新的离心管中,1500转,离心8分钟。吸去上清,加入PBS重悬细胞沉淀,然后1500转离心5分钟,去除上清,加入适量的PBS,吸管吹打悬浮细胞。取少量的悬浮液与台盼蓝溶液1:1混均后进行计数,用一干净的血球计数板,盖上盖片,从盖片两边滴入细胞悬液,使之充满计数板和盖片之间。计算计数板上对角大格内的总细胞数。


可进行的实验举例


在研究基因或者药物作用时,可以对该细胞系进行的实验有MTS检测细胞增殖实验、流式细胞仪检测细胞凋亡实验、流式细胞仪检测细胞周期等

Tumour-Secreted Protein S (ProS1) Activates a Tyro3-Erk Signalling Axis and Protects Cancer Cells From Apoptosis复制标题

肿瘤分泌蛋白S (ProS1) 激活Tyro3-Erk信号轴,保护癌细胞免受凋亡

发表时间:2019-11-22

影响指数:6.2

作者: Al Kafri N

期刊:Cancers (Basel)

The TAM subfamily (Tyro3, Axl, MerTK) of receptor tyrosine kinases are implicated in several cancers, where they have been shown to support primary tumorigenesis as well as secondary resistance to cancer therapies. Relatively little is known about the oncogenic role of Tyro3, including its ligand selectivity and signalling in cancer cells. Tyro3 showed widespread protein and mRNA expression in a variety of human cancer cell lines. In SCC-25 head and neck cancer cells expressing both Tyro3 and Axl, Western blotting showed that both natural TAM ligands ProS1 and Gas6 rapidly stimulated Tyro3 and Erk kinase phosphorylation, with ProS1 eliciting a greater effect. In contrast, Gas6 was the sole stimulator of Axl and Akt kinase phosphorylation. In MGH-U3 bladder cancer cells, which express Tyro3 alone, ProS1 was again the stronger stimulator of Tyro3 and Erk stimulation but additionally stimulated Akt phosphorylation. Conditioned medium from ProS1-secreting 786-0 kidney cancer cells replicated the kinase activation effects of recombinant ProS1 in SCC-25 cells, with specificity confirmed by ProS1 ligand traps and warfarin. In addition, ProS1 protected cancer cells from acute apoptosis induced by staurosporine, as well as additionally, long-term serum starvation-induced apoptosis in MGH-U3 cells (Tyro3 only), which reflects its additional coupling to Akt signalling in these cells.

译文

受体酪氨酸激酶的TAM亚家族(Tyro3,Axl,MerTK)与几种癌症有关,在这些癌症中,它们被证明支持原发性肿瘤的发生以及对癌症治疗的继发性抵抗。关于酪氨酸3的致癌作用,包括它的配体选择性和在癌细胞中的信号转导,人们知之甚少。酪氨酸3在多种人类肿瘤细胞系中广泛表达。在同时表达Tyro3和Axl的SCC-25头颈癌细胞中,Western blotting显示天然TAM配体ProS1和Gas6均能快速刺激Tyro3和Erk激酶磷酸化,ProS1的作用更大。相反,Gas6是Axl和Akt激酶磷酸化的唯一刺激因子。在单独表达酪氨酸3的MGH-U3膀胱癌细胞中,ProS1再次是酪氨酸3和Erk刺激的强刺激因子,但同时也刺激Akt磷酸化。从分泌ProS1的786-0肾癌细胞中提取的条件培养基复制了重组ProS1在SCC-25细胞中的激酶激活作用,其特异性经ProS1配体陷阱和华法林证实。此外,ProS1保护癌细胞免受staurosporine诱导的急性凋亡,以及长期血清饥饿诱导的MGH-U3细胞凋亡(仅Tyro3),这反映了ProS1对这些细胞Akt信号的额外耦合。

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