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SV-HUC-1 cell

肾内泌尿

关键词肾内泌尿 临床研究术语 细胞

词汇介绍

拓展阅读

解析

SV-HUC-1

释    义   n. 人膀胱上皮永生化细胞

例    句   To examine phenotypic responses to AOX1 modulation, we introduced AOX1 shRNA or control shRNA constructs into SV-HUC-1 cells.为了检测AOX1调控的表型反应,我们将AOX1shRNA或对照shRNA转化到SV-HUC-1细胞中。

 

Cell   英  /sel/   美  /sel/

释    义   n. 细胞;电池;蜂房的巢室;单人小室

               vi. 住在牢房或小室中

例    句   It means that if I have a biological cell, or some container with a membrane through which one of the constituents might pass.它的意思是如果我有一个生物细胞,或带膜的容器,其中一种组分可以通过这层膜。

概述

概述


SV-HUC-1细胞,是人膀胱上皮永生化细胞。这株细胞是正常膀胱组织用SV40病毒转染建株的。反复用非洲绿猴肾细胞平板测试检测传染性SV40的生成,结果都呈阴性。胁迫(如曝露于化学试剂)下可能激活病毒。ATCC还有一株化学转化的成瘤细胞株,MC-SV-HUC T2SV-HUC-1细胞在ATCC的编号是CRL-9520,价格是417.00美元。培养条件:F12K 10%FBS,温度是37摄氏度,气相包括95%的空气,5%的二氧化碳。传代方法:1:2-1:5传代。2-3天换液1次。形态是上皮细胞样,生长特性是贴壁生长。


细胞复苏


将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm皿中,加入约8 ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。


传代


(1)75%酒精喷洒整个培养瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲,然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入5-6 mL新鲜培养基(T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代,一般23天换一次液;


2待细胞长满瓶底面积80%-90%,需要对其进行传代,传代比例为1:31:63传代步骤:将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入3-5 ml PBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶,置于37°孵育消化(第一次消化需时常取出置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间,记录最佳消化时间,以便于下次消化),消化好后加入3 ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬液,1200 rpm离心3 min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。


保存


冻存条件:80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO,液氮储存。


注意事项


(1)收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。


2仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。


375%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养过夜,隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常,请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养。

Epigenetic loss of AOX1 expression via EZH2 leads to metabolic deregulations and promotes bladder cancer progression复制标题

通过EZH2导致AOX1表达的表观遗传缺失导致代谢失调并促进膀胱癌进展

发表时间:2019-08-05

影响指数:6.6

作者: Vantaku V

期刊:Oncogene

We performed ChIP assays to assess enrichment of EZH2 and H3K27me3 at the AOX1 promoter in EZH2 knockdown and GSK126-treated BLCA cells. Quantitative real-time PCR (ChIP-qPCR) was used to measure the H3K27 trimethylation and EZH2 occupancy at the AOX1 promoter locus. EZH2 levels were significantly reduced at the AOX1 promoter locus in EZH2 knockdown cells, but remained unchanged in GSK126-treated cells. However, both EZH2 knockdown and GSK126-treated BLCA cells showed a significant reduction in H3K27 trimethylation at the AOX1 promoter, which correlated with increased AOX1 expression in these cells.

译文

我们进行了芯片分析,以评估EZH2敲除和GSK126处理的BLCA细胞中AOX1启动子处EZH2和H3K27me3的富集。定量实时PCR(ChIP-qPCR)用于测定AOX1启动子位点的H3K27三甲基化和EZH2占有率。在EZH2敲除细胞中,AOX1启动子位点的EZH2水平显著降低,但GSK126处理的细胞中EZH2水平保持不变。然而,EZH2敲除和GSK126处理的BLCA细胞在AOX1启动子处的H3K27三甲基化均显著减少,这与AOX1在这些细胞中的表达增加相关。 接下来,我们研究了EZH2甲基转移酶活性在AOX1沉默中的作用。我们用表达野生型EZH2和突变型EZH2(ΔSET)的腺病毒构建物转染正常永生化膀胱上皮细胞(SV-HUC-1),该突变型EZH2具有截断的C-末端集域和缺乏甲基转移酶活性。表达野生型EZH2的SV-HUC-1细胞与对照细胞相比,AOX1 mRNA和蛋白质水平下降。相反,表达ΔSET结构的细胞在AOX1 mRNA和蛋白质水平上没有显著下降。这些结果表明EZH2结合并甲基化了AOX1启动子,使AOX1表达沉默。

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