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MTT assay

肾内泌尿

关键词肾内泌尿 实验技术 细胞活性测定

词汇介绍

拓展阅读

解析

MTT

释    义   n. 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐

例    句   MTT reduction occurs throughout a cell and can be significantly affected by a number of factors, including metabolic and energy perturbations, changes in the activity of oxidoreductases, endo-/exocytosis and intracellular trafficking. MTT的减少发生在整个细胞中,可以受到许多因素的显著影响,包括代谢和能量的扰动、氧化还原酶活性的变化、胞内外作用和细胞内运输。

 

Assay   英 /əˈseɪ/   美 /əˈseɪ/

释    义   n. 化验;试验

               vt. 分析;化验;尝试

               vi. 鉴定;经检验证明内含成分

同根词   assayer n. 试金者,尝试者;分析专家

例    句   The next step is to use these antibodies in a sensitive screening assay to determine their full potential in diagnosis of this devastating disease. 该研究的下一步就是使用这些抗体进行敏感的筛检试验,以确定他们对这种致命疾病的潜在诊断能力。

概述

概述


MTT是一种粉末状化学试剂,全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,汉语化学名为 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝。是一种黄颜色的染料,CAS No. : 298-93-1。MTT 法是Mosmann 1983年报道的,以后此方法得到了迅速发展并广泛应用于临床与科研研究。MTT检测法是一种检测细胞存活和生长的方法,该检测法主要有两个用途:药物(也包括其他处理方式如放射线照射)对体外培养的细胞毒性的测定;细胞增殖及细胞活性测定。

 

原理


MTT检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490 nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。缺点:由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。

 

实验试剂


MTT 溶液的配制方法:通常,此法中的MTT 浓度为5 mg/ml。因此,可以称取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中,用0.22 μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放4℃避光保存即可。在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。配制MTT时用PBS(pH=7.4)溶解。PBS配方:NaCl 8 g,KCl 0.2 g,Na2HPO4 1.44 g,KH2PO4 0.24 g调pH7.4,定容1L。

 

实验步骤


不同的应用实验步骤稍有不同,这里以普通的MTT实验法的步骤为例做介绍。(1)接种细胞:用含10%胎小牛血清的培养液配成单个细胞悬液,以每孔1000-10000个细胞(细胞浓度的问题见后面的注意事项)接种到96孔板,每孔体积100 ul。(2)培养细胞:同一般培养条件,培养1-3天(可根据试验目的和要求决定培养时间)。(3)呈色:培养1-3天后,5×的MTT试剂盒,将其稀释至1×MTT溶液后,96孔板每孔加50 ul,继续孵育4 h,终止培养,小心吸弃孔内培养上清液,对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加100 ul DMSO,振荡10 min,使结晶物充分融解。(4)比色:选择490 nm波长,在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以时间为横坐标,吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

Anti-cancer Effects of HNHA and Lenvatinib by the Suppression of EMT-Mediated Drug Resistance in Cancer Stem Cells复制标题

HNHA和Lenvatinib通过抑制EMT介导的肿瘤干细胞耐药的抗癌作用

发表时间:2018-02-01

影响指数:3.8

作者: Yong Sang Lee

期刊:Neoplasia

Anaplastic thyroid cancer (ATC) constitutes less than 2% of total thyroid cancers but accounts for 20-40% of thyroid cancer-related deaths. Cancer stem cell drug resistance represents a primary factor hindering treatment. This study aimed to develop targeted agents against thyroid malignancy, focusing on individual and synergistic effects of HNHA (histone deacetylase), lenvatinib (FGFR), and  sorafenib (tyrosine kinase) inhibitors. Patients with biochemically and histologically proven papillary thyroid cancer (PTC) and ATC were included. Cell samples were obtained from patients at the Thyroid Cancer Center, Gangnam Severance Hospital, Yonsei University College of Medicine, Seoul, Korea. PTC and ATC cells were treated with lenvatinib or sorafenib, alone or in combination with HNHA. Tumor-bearing mice (10/group) were administered 10 mg/kg lenvatinib (p.o.) or 40 mg/kg sorafenib (p.o.), alone or in combination with 25 mg/kg HNHA (i.p.) once every three days. Gene expression in patient-derived PTC and ATC cells was compared using a microarray approach. Cellular apoptosis and proliferation were examined by immunohistochemistry and MTT assays. Tumor volume and cell properties were examined in the mouse  xenograft model. HNHA-lenvatinib combined treatment induced markers of cell cycle arrest and apoptosis and suppressed anti-apoptosis markers, epithelial-mesenchymal transition (EMT), and the FGFR signaling pathway. Combined treatment induced significant tumor shrinkage in the xenograft model.

译文

间变性甲状腺癌(ATC)占总甲状腺癌的不到2%,但占甲状腺癌相关死亡的20-40%。癌症干细胞耐药性是阻碍治疗的主要因素。这项研究旨在开发针对甲状腺恶性肿瘤的靶向药物,重点研究HNHA(组蛋白脱乙酰基酶),lenvatinib(FGFR)和sorafenib(酪氨酸激酶)抑制剂的个体和协同作用。经生化和组织学证实为乳头状甲状腺癌(PTC)和ATC的患者也包括在内。细胞样品获自韩国首尔延世大学医学院江南遣散医院甲状腺癌中心的患者。 PTC和ATC细胞分别用lenvatinib或sorafenib或与HNHA联合处理。荷瘤小鼠(10只/组)每三天一次或与25 mg / kg HNHA(i.p.)组合给药10 mg / kg lenvatinib(p.o.)或40 mg / kg sorafenib(p.o.)。使用微阵列方法比较了患者来源的PTC和ATC细胞中的基因表达。通过免疫组织化学和MTT分析检查细胞凋亡和增殖。在小鼠异种移植模型中检查了肿瘤体积和细胞特性。 HNHA-lenvatinib联合治疗可诱导细胞周期停滞和凋亡的标志物,并抑制抗凋亡标志物,上皮-间质转化(EMT)和FGFR信号通路。联合治疗在异种移植模型中引起明显的肿瘤缩小。

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