免疫
词汇介绍
拓展阅读
解析
Polyclonal [,pɑli'klonəl]
释义 adj. 多克隆的;多元性繁殖系的;多细胞系的
例句 Polyclonal antibody preparation against the peptides of NDRG family proteins.抗人NDRG家族寡肽的多克隆抗体制备。
Antibody 英 [’æntibɒdi] 美 [’æntibɑːdi]
释义 n. [免疫] 抗体
例句 Antibodies are very specific in that each antibody will recognize and bind to one protein region only.抗体具有非常特异性,每种抗体只识别和结合一种蛋白质区域。
概述
概述
多克隆抗体是指用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物,刺激机体所产生的具有不同抗原表位、不同抗体特异性的抗体,所产生的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物。
抗体制备
多克隆抗体主要从动物免疫血清、恢复期患者血清或免疫接种人群的血清中获得。
优点
多克隆抗体由于刺激抗原表位多,其特异性较弱,刺激抗原多为自然源性抗原,故其抗体稳定性较好,其制备过程中对免疫原纯度要求较高,免疫原纯度越高越好;其制备过程并非完全一致,使其标准化难以实现,不同批次的抗体质量差异较大,但能识别较多不同表位,由于其产生的抗体为混合物,难以标准化,较容易发生交叉反应,但因其制备过程相对简单、制备周期短及制备成本低等优势使其受到广泛推广。
制备过程
新型的多克隆抗体制备技术,即在生物体内过表达DNA克隆抗原区域使机体产生免疫反应而获得抗体。使用的质粒载体一般均含有β-actin的启动子和CMV增强子,能够增强下游插入基因的表达。将含有目的片段的重组质粒肌肉注射入试验动物体内,使试验动物外源表达目的基因,发生抗原抗体反应,从而获得目的多克隆抗体。
多克隆抗体制备的过程相对比较复杂,现以克隆阴道毛滴虫的MIF基因并纯化MIF蛋白,制备多克隆抗体为例介绍制备过程。将镜检阴道毛滴虫阳性的阴道分泌物标本接种于培养基中。每48 h镜检并传代至培养基中无白细胞、细菌等。根据基因库中阴道毛滴虫MIF cDNA序列,用软件分析酶切位点,结合pET-30a(+)多克隆位点,设计引物。用试剂法提取阴道毛滴虫mRNA,参照逆转录试剂盒说明书逆转录成cDNA。以该cDNA为模板,扩增TvMIF。PCR产物和pTG19-T载体连接并于特定培养琼脂上培养,挑取单个白色菌落经增菌后提取质粒,经酶切和PCR鉴定后取阳性标本。取测序成功的pTG19-T-TvMIF质粒经BamHⅠ和XhoⅠ酶切后,用凝胶回收试剂盒回收目的片段和载体片段,16℃过夜连接后转化至大肠埃希菌BL21。并在含卡那霉素抗性的LB平板上筛选,挑取单个阳性菌落,增菌后提取质粒。经双酶切和PCR扩增鉴定后用于后续实验。
开发一种敏感和特异性的多克隆抗体,用于Clavibacter michigansis subsp.sepedonicus的血清学检测。
发表时间:2017-01-09
影响指数:2.8
作者: Przewodowski W
期刊:PLOS ONE
Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus (Cms) (Spickermann and Kotthoff 1914) Davis et al. 1984, which causes bacterial ring rot (BRR), is one of the most important pathogens of potato. The genus Clavibacter consists of one species Clavibacter michiganensis (Cm),divided into five subspecies based on host specificity and biochemical and genetic characteristics. Clavibacter michiganensis subspecies are actinomycete plant pathogens residing mainly in the xylem vessels and inducing systemic symptoms, including wilting, stem cankers, and vascular discolouration.
译文