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Nano-zymography Using Laser-Scanning Confocal Microscopy Unmasks Proteolytic Activity of Cell-Derived Microparticles.
使用激光扫描共聚焦显微镜的纳米酶谱揭示细胞来源的微粒的蛋白水解活性。
Extracellular vesicles MPIO Optical Imaging Phosphatidylserine exosomes fibrinolysis inflammation
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摘要

Cell-derived microparticles (MPs) are nano-sized vesicles released by activated cells in the extracellular milieu. They act as vectors of biological activity by carrying membrane-anchored and cytoplasmic constituents of the parental cells. Although detection and characterization of cell-derived MPs may be of high diagnostic and prognostic values in a number of human diseases, reliable measurement of their size, number and biological activity still remains challenging using currently available methods. In the present study, we developed a protocol to directly image and functionally characterize MPs using high-resolution laser-scanning confocal microscopy. Once trapped on annexin-V coated micro-wells, we developed several assays using fluorescent reporters to measure their size, detect membrane antigens and evaluate proteolytic activity (nano-zymography). In particular, we demonstrated the applicability and specificity of this method to detect antigens and proteolytic activities of tissue-type plasminogen activator (tPA), urokinase and plasmin at the surface of engineered MPs from transfected cell-lines. Furthermore, we were able to identify a subset of tPA-bearing fibrinolytic MPs using plasma samples from a cohort of ischemic stroke patients who received thrombolytic therapy and in an experimental model of thrombin-induced ischemic stroke in mice. Overall, this method is promising for functional characterization of cell-derived MPs. 

译文

细胞来源的微粒 (MPs) 是由激活的细胞在细胞外环境中释放的纳米大小的囊泡。它们通过携带亲本细胞的膜锚定成分和细胞质成分作为生物活性的载体。尽管检测和鉴定细胞来源的 MPs 在许多人类疾病中可能具有很高的诊断和预后价值,但它们大小的可靠测量, 使用目前可用的方法,数量和生物活性仍然具有挑战性。在目前的研究中,我们开发了一种使用高分辨率激光扫描共聚焦显微镜直接成像和功能表征 MPs 的方案。一旦被捕获在膜联蛋白-V 涂层的微孔上,我们开发了几种使用荧光报告基因来测量它们的大小、检测膜抗原和评估蛋白水解活性 (纳米酶谱) 的检测方法。特别是,我们证明了这种方法在检测抗原和组织型纤溶酶原激活剂 (tPA) 的蛋白水解活性方面的适用性和特异性, 来自转染细胞系的工程 MPs 表面的尿激酶和纤溶酶。此外, 我们能够利用接受溶栓治疗的一组缺血性中风患者的血浆样本和小鼠凝血酶诱导的缺血性中风的实验模型来识别携带 tPA 的纤溶 MPs 的子集。。总的来说,这种方法有望用于细胞来源的 MPs 的功能表征。

Laser Scanning Confocal Microscopy

心血管 LSCM 治疗仪器
概述  :  

激光共聚焦扫描显微技术(LSCM)是一种高分辨率的显微成像技术。普通的荧光光学显微镜在对较厚的标本(例如细胞)进行观察时,来自观察点邻近区域的荧光会对结构的分辨率形成较大的干扰。共聚焦显微技术的关键点在于,每次只对空间上的一个点(焦点)进行成像,再通过计算机控制一点一点地扫描形成标本的二维或者三维图像。在此过程中,来自焦点以外的光信号不会对图像形成干扰,从而大大提高了显微图像的清晰度和细节分辨能力。应用特点(一)观察活细胞、活组织LSCM在不损伤细胞的前提下,对活组织、活细胞进行观察和测量,

Laser 英 [ˈleɪzə(r)]  美 [ˈleɪzər] 

释    义   n. 激光

短    语   laser beam 激光束

laser welding 激光焊接

laser cutting 激光切割

例    句   We consider that is caused by the inhomogeneity of the laser rod. 

我们考虑这是由于激光棒的不均匀性引起的。

 

Scanning 英 ['skænɪŋ]  美 ['skænɪŋ] 

释    义   n. 扫描;[计] 搜索,观测;扫掠

adj. 扫描的;观测的;搜索的;扫掠的

v. 扫描(scan的现在分词);浏览

短    语   differential scanning calorimetry 差示扫描量热法

laser scanning 激光扫描;镭射扫瞄

同根词   词根 scan

n. scan 扫描;浏览;审视;细看

scanner [计] 扫描仪;扫描器;光电子扫描装置

vi. scan 扫描;扫掠

例    句   Vulnerability scanning technology is an emerging technology, to solve it from another angle issueof network security. 

漏洞扫描技术是一门新兴的技术,它从另一个角度解决网络安全问题。

 

Confocal 英 [kɒn'fəʊk(ə)l]  美 [kɑn'fokl] 

释    义   adj. [数] 共焦的;同焦点的

例    句   We present a novel confocal laser method (CLM) for precise testing of the dioptric power of both positive and negative intraocular lens (IOL) implants. 

提出了一种新的共焦激光方法,可以精确测量人工晶状体植入物的屈光度。

 

Microscopy 英 [maɪˈkrɒskəpi]  美 [maɪˈkrɑːskəpi] 

释    义   n. 显微镜检查;显微镜使用;显微镜学

短    语   electron microscopy 电子显微镜学,电子显微镜

scanning electron microscopy 扫描电子显微镜检查法

同根词   词根 microscope

adj. microscopic 微观的;用显微镜可见的

microscopical 显微镜的

例    句   This is the webpage of Microscopy Research And Technique. 

这是《显微镜研究和技术》杂志的网页。


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