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Dual-Luciferase Reporter Assay

心血管

关键词心血管 实验技术 以荧光素为底物来检测萤火虫荧光素酶活性

词汇介绍

拓展阅读

解析

Dual 英 /ˈdjuːəl/ 美 /ˈduːəl/ 

释    义   adj. 双的;双重的

n. 双数;双数词

n. (Dual)人名;(法)迪阿尔

例    句   The reason, the researchers say, is that we have a dual vision system.  其中的原因,研究人员说是因为我们有双重的视觉系统。

 

Luciferase /lʊ'sɪfə,res; lʊ'sɪfə,rez/

释    义   n. [生化] 荧光素酶

同根词   luciferin n 荧光素

例    句   He added the gene responsible for the formation of luciferase to the genome of herpes simplex virus type 1 and injected the modified virus into mice.他将荧光素酶的基因加入了单纯疱疹病毒1型病毒中,并且将这种修改过的病毒注入了小鼠体内。

 

Reporter 英 /rɪˈpɔːtə(r)/ 美 /rɪˈpɔːrtər/

释    义   n. 记者;报告

例    句   He is not so much a writer as a reporter. 他与其说是个作家,毋宁说是个记者。

 

Assay /əˈseɪ/

释    义   n. 化验;试验

同根词   assayer n 试金者,尝试者;分析专家

例    句   Nevertheless, IMA currently remains the only ischemia assay to have reached the clinical validation stage. 尽管如此,IMA目前依然是仅有的达到临床检验阶段的缺血分析方法。

概述

实验原理 转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子,也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合,这些特异性的序列被称为顺式作用元件,转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合,从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验(luciferase assay)是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。 其原理主要为:1)构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告

Development and Validation of a Novel Dual Luciferase Reporter Gene Assay to Quantify Ebola Virus VP24 Inhibition of IFN Signaling复制标题

一种新型双荧光素酶报告基因检测方法的开发和验证,用于定量埃博拉病毒VP24对IFN信号的抑制

发表时间:2018-02-24

影响因子:3.8

作者: Elisa Fanunza

期刊:Viruses

Various parameters of the micro transfection method were optimized: amount of plasmids, amount of IFN-α and stimulation time. Measurements of luciferase activity performed at various times yielded optimal results between 8 and 24 h post transfection. Thus, a shorter 8 h incubation was chosen. In literature, luciferase assay performed to evaluate EBOV VP24 inhibition requires at least 16 h of stimulation to measure the luminescence signal [14,15,23,31,32]. The present method allows data to be obtained more rapidly. Conventional transfection assays also require the use of large quantities of plasmids and reagents [14,15,23], while in the present system, as little as 60 ng/well for plasmid reporter can be used, compared to 0.5–1 µg/well in a 6-well plate [14,23]. Hence, the present method appears to be extremely sensitive and allows considerable economy of all reagents.

译文

优化了微转染方法的各种参数:质粒数量,IFN-α数量和刺激时间。在不同时间进行的萤光素酶活性测量在转染后8至24小时之间产生了最佳结果。因此,选择了较短的8小时孵育。在文献中,进行荧光素酶分析以评估EBOV VP24抑制作用需要至少16小时的刺激才能测量发光信号[14,15,23,31,32]。本方法允许更快地获得数据。常规转染测定还需要使用大量的质粒和试剂[14,15,23],而在本系统中,质粒报告子的孔数仅为60 ng /孔,而孔数为0.5–1 µg在6孔板中[14,23]。因此,本方法似乎是非常灵敏的,并允许所有试剂的经济性。此外,与使用昂贵的商业试剂盒相比,使用自制的试剂读取荧光素酶活性是一种方便且超低成本的系统