Dual 英 /ˈdjuːəl/ 美 /ˈduːəl/ 

释    义   adj. 双的；双重的

n. 双数；双数词

n. (Dual)人名；(法)迪阿尔

例    句   The reason, the researchers say, is that we have a dual vision system.  其中的原因，研究人员说是因为我们有双重的视觉系统。

Luciferase /lʊ'sɪfə,res; lʊ'sɪfə,rez/

释    义   n. [生化] 荧光素酶

同根词   luciferin n 荧光素

例    句   He added the gene responsible for the formation of luciferase to the genome of herpes simplex virus type 1 and injected the modified virus into mice.他将荧光素酶的基因加入了单纯疱疹病毒1型病毒中，并且将这种修改过的病毒注入了小鼠体内。

Reporter 英 /rɪˈpɔːtə(r)/ 美 /rɪˈpɔːrtər/

释    义   n. 记者；报告

例    句   He is not so much a writer as a reporter. 他与其说是个作家，毋宁说是个记者。

Assay /əˈseɪ/

释    义   n. 化验；试验

同根词   assayer n 试金者，尝试者；分析专家

例    句   Nevertheless, IMA currently remains the only ischemia assay to have reached the clinical validation stage. 尽管如此，IMA目前依然是仅有的达到临床检验阶段的缺血分析方法。

实验原理

转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase assay）是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。

其原理主要为：1）构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，如pGL3-basic等。2）将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。3）加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。

实验步骤

1.启动子萤光素酶报告载体与共转染质粒按照质量等比例、总量0.8μg的原则转染细胞，36h后收获细胞。

2. 96孔板用移液枪吸弃细胞培养基，PBS冲洗细胞一次，加入1×PLB细胞裂解液20μl，置于室温震荡裂解20min。

3.轻轻吹打细胞，取10μl细胞裂解液加入50μl Luciferase Assay Reagent（荧光试剂），轻轻震荡混匀，立刻置于单通道多标记荧光检测仪中测定Firefly Luciferase活性。

3.读数后立即加入50µl Stop Reagent（终止反应试剂）轻轻震荡混匀，读取Renilla  Luciferase活性。

4.所得的结果为各个实验样品的Firefly Luciferase活性与Renilla荧光素酶活性的比值。每个实验组重复3-4孔，整个实验独立重复3次。实验结果均为3次独立的实验结果的平均值。所有的结果均以平均值±标准差(mean±S.D.)表示。

实验应用

1.在遗传毒性检测中的应用：正常情况下，生物体内的p53蛋白水平维持在较低水平，当细胞出现DNA损伤或者低氧刺激时，p53蛋白就会大量表达并通过三种方式应答DNA损伤，激活p21基因的表达引起细胞周期阻滞，激活DNA修复相关基因的表达，但如果损伤过度，p53基因就会激活促凋亡基因的表达诱导细胞凋亡。因此，p53蛋白的表达水平和转录活性的提高，是细胞出现DNA损伤的一种重要表现形式。在此理论基础上，可以构建由p53或p53靶基因的启动子驱动的荧光虫荧光素酶表达载体，辅以海肾荧光素酶报告基因载体作为内参质粒转染到细胞中，观察具有遗传毒性的化学物质对荧光素酶报告基因表达的诱导性，从而检测化学物质遗传毒性。

2.在信号通路研究中的应用：双荧光素酶报告基因系统常被运用于研究p53信号通路及NF-kB信号通路。P53信号通路在1中已作阐述，通常构建由p53或p53靶基因的启动子驱动的荧光虫荧光素酶表达载体并转染到细胞系中，在此基础上进行p53信号通路相关的研究。NF-kB即核转录因子，NF-kB信号通路核心成分是IkB激酶复合物、IkB抑制蛋白和NF-kB二聚体。当细胞受到来自胞内外的刺激后，IkB蛋白降解，NF-kB二聚体释放。释放后的二聚体被进一步激活后转移至细胞核与目的基因结合以促进目的基因的转录。

3.在转录活性分析中的应用：某些转录因子仅与其靶启动子中的特异顺序(顺式作用元件)共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。

4.其他领域：1）潜在启动子/启动子核心区域检测；2）潜在增强子/抑制子等调控子核心元件检测；3）启动子区可能的转录因子结合位点检测；4）启动子/增强子与转录因子的相互作用；5）病毒/细胞相互作用；6）药物等化学诱导因素对启动子活性的调节（抑制或增强）；7）射线等物理诱导因素对启动子活性的调节（抑制或增强）。